CRISPR/Cas13a具(ju)有(you)RNA引导的(de)RNA切(qie)割能(neng)力，RNA引导反式核酸(suan)内切(qie)酶活性(xing)是高度特异(yi)的(de)，高效切(qie)割ssRNA，每个激活Cas13a蛋白可以识(shi)别(bie)10⁴ 拷(kao)贝RNA。CRISPR/Cas13a强大信号放(fang)大能力使RNA检(jian)测灵敏(min)度能够降低到飞摩尔(er)（10^-15M）水平(ping)。

1、CLISA检测原(yuan)理

CLISA（CRISPR/Cas signal amplification Linked ImmunoSorbent Assay）是CRISPR-based单分子免疫诊断技术平台，灵敏度达fM或fg/mL，高于ELISA 1,000倍，精准分析多种疾病的超低浓度生物标志物。

结(jie)(jie)合(he)“三明治结(jie)(jie)构”免疫结(jie)(jie)合(he)机制(zhi)，用含有T7启(qi)动子序列生物素(su)化双链DNA（dsDNA）取代酶(mei)放(fang)大(da)体系。T7聚合(he)酶(mei)识别启(qi)动子序列进行转录(lu)，产生大(da)量单链RNA分(fen)子拷贝。crRNA识别转录(lu)RNA分(fen)子导致CRISPR/Cas13反式(shi)切割活(huo)性(xing)激活(huo)。两端荧光团和猝(cu)灭基团标记(ji)的短ssRNA报告探针通(tong)过反式(shi)切割活(huo)性(xing)被切割。

相较ELISA免疫检测方法，CLISA利用T7转录放大分子数，CRISPR剪切放大信号，灵敏度提升1,000倍，检测限达fg/mL。

      2、主(zhu)要试剂组分

3、试剂盒检测性能

 反应时间：3小时  (免疫(yi)反应0.5小时，转录(lu)反应1小时，Cas荧(ying)光信(xin)号(hao)检(jian)测0.5小时。)

 线性范围：50fg/mL~5ng/mL

 最低检测(ce)限：10fg/mL

4. 开(kai)发产品线

       CLISA主要用于开发fmol或fg/mL浓度的蛋白标志物临床诊断产品。